I. Kurzbeschreibung des Forschungsfeldes Ziel des Forschungsvorhabens sind zelluläre und molekulare Untersuchungen zur Rolle extrazellulärer Vesikel (EVs) für die Kommunikation von Hautzellen im Kontext der Wundheilung (s. Arbeitsprogramm der Projektbeschreibung). Von zentraler Bedeutung hierfür ist die Isolierung und nachfolgende Analyse von EVs aus den Kulturüberständen stimulierter, primärer Keratinozyten und humaner mesenchymaler Stammzellen mithilfe des MACSQuant Analyzers. EVs stellen wegen ihrer geringen Größe, ihres speziellen Aufbaus und der Notwendigkeit einer zuverlässigen Erkennung als Voraussetzung für eine effiziente Anreicherung besonders hohe Anforderungen an das Durchflusszytometer. II. Bedarf Der Durchflusszytometer muss zwingend folgende Anforderungen kumulativ erfüllen: - Zuverlässigen Erfassung besonders kleiner EVs (z.B. Exosomen), sowie sämtlicher Unterformen von EVs - Schonende Isolierung, Anreicherung und sofortige Analyse von EV´s aus Kulturüberständen, um darin enthaltene microRNAs untersuchen zu können. - Anreicherung von Zellen und ihrer Subpopulationen aus Mischkulturen, um diese einer differentiellen Analyse unterziehen zu können. - Untersuchungen zur Übertragbarkeit der Resultate aus THP-1-Monozyten-Monokulturen auf primäre, humane Zellen aus Vollblut (PBMC). III. Technische Eigenschaften des Miltenyi MAC SQuant Analyzer 16 Durchflusszytometers Miltenyi Biotec ist Hersteller und einziger Anbieter des MACSQuant Analyzer 16 und MACS MiniSampler Plus. Die Geräte sind nicht bei anderen Anbietern erhältlich. 1. Der MACSQuant Analyzer 16 verbindet eine benutzerfreundliche Automatisierung mit leistungsstarker, durchflusszytometrischer Analyse. Die geringe Stellfläche (67×50 cm) ermöglicht einen Betrieb des Gerätes auf einem normalen Labortisch. Es verfügt über drei Laser (405 nm, 488 nm, 640 nm) für eine stabile und konsistente Lichtdetektion. Darüber erlaubt das Gerät die vollautomatische Verarbeitung von Zellproben, einschließlich Probenmarkierung, Probenmischung, Probeninkubation, Probenverdünnung und magnetischer Voranreicherung. Im Express Modes läuft die Datenerfassung und -analyse vollautomatisch. 2. Der motorisierte MACS MiniSampler Plus gewährleistet durch den Einsatz von vorkühlbaren Probenhaltern (MACS Chill Racks) die Probenqualität und -integrität während der Messung. Als Erweiterung des MACSQuant Analyzer 16 erlaubt der MACS MiniSampler Plus die flexible Verarbeitung mehrere Proben aus 12×75 mm Röhrchen oder aus 96-Well-Plattenformaten (U-, V-, Flat-Bottom- oder Deep-Well-Platten). 3. Vollautomatische Wartungsverfahren wie PMT-Kalibrierung und Geräteabschaltung sind Teil der Standardausstattung des Instruments. Die Verwendung der MACSQuantifyTM Software ermöglicht die voll automatische Aufnahme und Verarbeitung mehrerer Proben, wodurch auch im Hochdurchsatz unter konstanten Bedingungen gearbeitet werden kann. 4. Der MACSQuant 16 verfügt über 14 Fluoreszenz- und zwei Streulichtkanäle und erlaubt damit eine große Flexibilität bei der Zusammenstellung von Markern für die Zellanalyse. Der Seitwärtsstreulichtkanal (Side Scatter) wird von der 405 nm-Lichtquelle abgeleitet, weil die geringe Wellenlänge die Sensitivität für die Messung kleiner Partikel, im Vergleich zur herkömmlich verwendeten 488 nm-Lichtquellen, erhöht. Die Angabe kann jederzeit als absolute Zellzahl in Zellen/?l oder Zellen/ml erfolgen. 5. Die MACSQuantify Software kann alle üblichen durchflusszytometrischen Datenanalysen und -visua lisierungen, einschließlich Histogrammen, Punktdiagrammen, Dichtediagrammen, Gatings, Überlagerungen und statistische Ansichten durchführen. Die Datenanalyse kann auch in Bezug auf Fläche, Höhe und Breite erfolgen. Die Messdaten werden in speziellen Verzeichnissen mit Back-Up-Funktion abgelegt. 6. Der MACSQuant Analyzer 16 verwendet Smart Gain-Technologie zur Kalibrierung und Qualitätskon trolle. Dieser Prozess ermöglicht die gemeinsame Nutzung von Einstellungen zwischen mehreren MACSQuantAnalyzern. Die Geräteeinstellungen werden automatisch angepasst, wodurch an unterschiedlichen Geräten mit gleichen Grundeinstellungen gearbeitet werden kann. 7. Der MACSQuant Analyzer 16 kann eine Voranreicherung von magnetisch markierten Zellen vor der durchflusszytometrischen Analyse durchführen. Dieses Feature basiert auf der bekannten MACS-Technologie unter Verwendung der MACSQuant-Säule in Kombination mit der MACS Cell Enrichment Unit. Diese Funktion ist besonders nützlich für die Analyse selten vorkommender Zellen, wie z.B. antigenspezifischer T-Zellen oder Stammzellen, die mit MACS MicroBeads markiert werden können. Eine einfache Bedienung des MACSQuant Analyzer 16 wird durch einen farbigen Touchscreen mit intuitiver Menüführung gewährleistet. Der Nutzer hat die Möglichkeit, vorprogrammierte Datenerhebungen oder Analysen mit Hilfe von MACSQuant Express Modes durchzuführen oder vorgefertigte Probenanalyseprotokolle individuell anzupassen. Alle benutzerdefinierten Programme können für eine spätere, erneute Nutzung gespeichert werden. Die Datenanalyse kann direkt am Gerät oder an einem externen Computer erfolgen. Die MACSQuantify Software bietet hierfür eine Vielzahl von Funktionen und Anzeigeoptionen. 9. Der MACSQuant Analyzer 16 kann mit Liquid Handling- und Probenverwaltungsplattformen von Drittanbietern kombiniert werden, was das Einsatzspektrum enorm erweitern kann. Assay-Anpassungen und Integrationsoptionen können auf Anfrage bereitgestellt und in der Regel auch nachträglich noch realisiert werden. 10. Online-Anbindung des Kunden mit Live-Support direkt am Gerät. Es stehen individuelle Servicever träge zur Verfügung, einschließlich Optionen für vorbeugende Wartungen bis hin zu Full-Service Verträgen.

Kauf und Wartung eines Durchflusszytometers "MACSQuant Analyzer 16"

11. Die von Miltenyi angebotenen MACSQuant-Puffer und -Lösungen wurden zudem auf höchste Leistung und Funktionalität des MACSQuant Analyzer 16 optimiert. Die Flüssigkeitsbehälterhalter des Instruments sind mit farbcodierten LED-Anzeigen ausgestattet, welche den Nutzer bereits von weitem per Lichtsignal informieren, ob z.B. das Geräte einsatzbereit ist oder gerade Proben prozessiert, Puffer ausgetauscht oder Abfälle entfernt werden müssen. Puffer können ohne Versuchsunterbrechung gewechselt werden. Nach unserem Kenntnisstand, wird die Kombination der aufgeführten Funktionen und Nutzen aktuell durch kein anderes alleinstehendes Gerät oder durch einen anderen Anbieter geboten. IV. Alleinstellung: Abgrenzung des Miltenyi MAC SQuant Analyzer 16 zu anderen Anbietern Im Hinblick auf die geplanten Anwendungen grenzt sich der MACSQuant Analyzer 16 von ähnlichen Systemen im Wesentlichen durch folgende wichtige Eigenschaften ab: EV-Anreicherung und Analyse mit speziellen Assays, magnetischen Antikörpern, Kits und Protokollen Das Gerät verfügt nicht nur über einen 405 nm Laser, der den Nachweis besonders kleiner EVs, wie Exosomen, ermöglicht, sondern bietet auch die Möglichkeit zur schonenden Isolierung und detaillierten Analyse aller bekannten EV-Typen unter Verwendung speziell für das Gerät optimierter, Antikörper-basierter Assays und Kits. So verwendet das Miltenyi MACSPlex Exosome Kit besondere Capture Beads, an die 37 verschiedene Antikörper gekoppelt sind, welche sämtliche Unterformen von EVs erkennen. Mit diesem Kit und einem für das Gerät optimierten Protokoll können EVs aus Kulturüberständen angereichert und sofort im Express Mode des MACSQuant 16 durchflusszytometrisch analysiert werden. Für die Isolierung und Reinigung größerer Mengen von EVs bietet Miltenyi ein Verfahren an, das auf der Verwendung von Magnetic MicroBeads beruht (MACS(R)) und eine besonders schonende Anreicherung der empfindlichen EVs ermöglicht. Diese bereits auf das MACSQuant 16 abgestimmten Assays und Kits, insbesondere deren kombinierter Einsatz, stellen für das Projekt eine enorme Einsparung an Zeit und Sachmitteln dar, die andernfalls für die Etablierung dieser Anwendungen an Geräten anderer Hersteller notwendig wären. Anreicherung von Zellen über spezielle Säulen und magnetische Antikörper Das Prinzip der magnetischen Beads MACS(R) von Miltenyi, erlaubt neben EVs auch die selektive Anreicherung von Zellen, etwa Monozyten oder Makrophagen, aus Mischkulturen wie PBMC. Ziel beim Abschluss des Forschungsprojektes sind Untersuchungen zur Übertragbarkeit der an THP-1-Monozyten-Monokulturen gesammelten Ergebnisse auf das Gemisch primären Zellen aus Vollblut (PBMC). Hierfür ist der Einsatz von MACS(R)-Beads im MACSQuant Analyzer 16 vorgesehen. Die auf das Gerät abgestimmten MACS(R) Kits und Protokolle sparen wertvolle Etablierungszeit und Sachmittel. Fazit: Die Kombination der oben aufgeführten, funktionellen Eigenschaften in einem einzelnen Gerät macht den MACSQuant-Analyzer-16 einzigartig auf dem Markt. Das Gerät mit den darauf abgestimmten Anwendungen (Antikörper, Kits etc.) gewährleistet eine bestmögliche Vergleichbarkeit und Reproduzierbarkeit der damit gewonnenen Forschungsergebnisse, auch mit einem anderen, beim Kooperationspartner Bundeswehr vorhandenen MACSQuant-Analyzer-10, als Voraussetzung für die fristgerechte Durchführung des umfangreichen Arbeitsprogrammes im Forschungsvorhaben, wie beim Bundesamt für Ausrüstung, Informationstechnik und Nutzung der Bundeswehr beantragt und gemäß Zuwendungsbescheid vom 30.03.2026 bewilligt. Der Kauf eines oder möglicherweise mehrerer anderer Geräte, die diese Anwendungen abdecken, kommt daher für uns nicht in Frage. V. Rechtliche Würdigung Die dargestellten Alleinstellungsmerkmale spiegeln den in § 14 Absatz 4 Nr. 2 b) VgV aufgeführten Ausnahmetatbestand wider. Kein anderes Produkt am Markt vermag das vom LMU Klinikum zwingend benötigte Anforderungsprofil auch nur im Ansatz erfüllen. Einzig das Durchflusszytometers "MACSQuant Analyzer 16" von der Firma Miltenyi Biotec B.V. & Co. KG bietet die zuverlässigen Erfassung besonders kleiner EVs (z.B. Exosomen), inklusive sämtlicher Unterformen von EVs, sowie die erforderliche schonende Isolierung, Anreicherung und sofortige Analyse von EV´s aus Kulturüberständen, um darin enthaltene microRNAs untersuchen zu können. Damit verbunden ist die zwingend erforderliche Anreicherung von Zellen und ihrer Subpopulationen aus Mischkulturen, um diese einer differentiellen Analyse unterziehen zu können. Es bietet zudem die Möglichkeit, Untersuchungen zur Übertragbarkeit der Resultate aus THP-1-Monozyten-Monokulturen auf primäre, humane Zellen aus Vollblut (PBMC) durchzuführen. Uns ist kein anderes am Markt verfügbare Gerät bekannt, das jede dieser für uns unerlässlichen Anforderungen erfüllen könnte. Ergänzend zu der Ausnahme von der Ausschreibungspflicht aus Gründen der Alleinstellung kommt der Ausschlussgrund der Forschung nach § 116 Absatz 1 Nr. 2 GWB zum Tragen. Im vorliegenden Projekt handelt es sich um Grundlagenforschung: diese umfasst experimentelle oder theoretische Arbeiten, die in erster Linie dem Erwerb neuen Grundlagenwissens dienen und keine direkten kommerziellen Anwendungsmöglichkeiten erkennen lassen. Die Ergebnisse werden publiziert und kommen der Allgemeinheit zugute. Dem Zuwendungsgeber steht somit ein nicht ausschließliches Nutzungsrecht zu, womit die Voraussetzungen des § 116 Absatz 1 Nr. 2 GWB vorliegen. Eine vernünftige Alternative oder Ersatzlösung gibt es nicht. Darüber hinaus ist der mangelnde Wettbewerb nicht das Ergebnis einer künstlichen Einschränkung der Auftragsparameter. Die Anschaffung wurde noch nicht getätigt und wird erst bei beschwerdefreiem Verlauf der Ex-Ante-Transparenzbekanntmachung erfolgen.